因此一般只在下列情况下才做RAST:①皮试结果难以肯定,但需提供进一步的诊断证据者;②不适宜做皮试或激发试验者,例如老年、幼儿、妊娠妇女、患有皮肤病、对变应原有严重过敏史或正服用抗过敏药物以及重病者;③观察脱敏治疗效果或研究变态反应机制。
ELISA法与RAST有相似的优点,而且还有独特的长处,如没有同位素污染、酶标抗体可长期保存,因此在国内应用较多。用ELISA测试屋尘和一些花粉的结果与RAST符合率较高,且与临床也较符合,但与皮肤试验的符合率可能不够理想。
CAP吸咐变应原有单价,有多价,如多价霉菌,多价食物(Fx5E,含6种食物过敏原),多价羽毛等,多价变应原阳性后,再进一步确定单个变应原成分。目前国内应用较多。
三、抗血细胞抗体的检测
血细胞抗体是Ⅱ型变态反应的主要介质,检测抗血细胞抗体对Ⅱ型变态反应的诊断有重要的意义,具体方法和临床分析参见临床血液学和临床基础检验学以及凝集反应等有关章节。主要包括Rh抗体检测、抗红细胞、血小板、白细胞等。
四、循环免疫复合物的检测
Ⅲ型超敏反应的发生主要是由循环免疫复合物(CIC)引起,通过检测CIC可以证实某些疾病是否与Ⅲ型超敏反应有关,也可帮助分析判断疾病的进程及转归。
(一)抗原特异性免疫复合物的检测
抗原特异性免疫复合物的检测是通过检测免疫复合物中抗原特异性来检测CIC.优点是特异性高,通过检测可以了解引起免疫复合物病的抗原。但在大多数情况下,免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂,所以抗原特异性方法并不常用。
(二)抗原非特异性免疫复合物的检测
抗原非特异性免疫复合物的检测仅是检测血清中循环免疫复合物,方法很多。
(三)临床意义
判定免疫复合物为发病机制的证据有三:①病变局部有IC沉积;②CIC水平显著升高;③明确IC中的抗原性质。第三条证据有时很难查到,但至少要具备前两条,单独CIC的测定不足为凭。人体在健康状态下也存在少量的CIC(大约l0~20μg/ml),其生理与病理的界限不易区分。另外,CIC检测的方法太多,其原理各不相同,用一种方法测定为阳性,另一种方法检测可能为阴性;但与免疫组化法一起检测,其意义就大得多。
目前已经明确系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、部分肾小球肾炎和血管炎等疾病为免疫复合物病,CIC检测对这些疾病仍是一种辅助诊断指标,对判断疾病活动和治疗效果也有一定意义。在发现紫癜、关节痛、蛋白尿、血管炎和浆膜炎等情况时,可考虑免疫复合物病的可能性,进行CIC和组织沉积IC的检测。另外,患有恶性肿瘤时CIC检出率也增高,但不出现Ⅲ型变态反应的损伤症状,称之为临床隐匿的IC病,然而这种状态常与肿瘤的病情和预后相关。
五、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞计数
(一)嗜酸性粒细胞计数
嗜酸性粒细胞参与Ⅰ型变态反应,因此嗜酸性粒细胞增多可作为Ⅰ型变态反应的辅助诊断指标,而且可作为疗效判定的指标之一。
嗜酸性粒细胞计数可用白细胞分类计数法,也可以用直接计数法,目前多采用后者。该类细胞的胞浆颗粒中富含碱性氨基酸和碱性蛋白,其等电点为pH11,因此呈嗜酸性,易与阴离子结合而被染色。常用的染色液含伊红、石炭酸和福尔马林,该溶液可溶解红细胞和其他白细胞,增加背景的清晰度,使嗜酸性粒细胞易于识别。
(二)嗜碱性粒细胞计数
嗜碱性粒细胞亦参与Ⅰ型变态反应,其计数方法主要是直接计数法。嗜碱性粒细胞胞浆颗粒中肝素的硫酸根容易与阳离子染料结合而着色,现在常用的酸性染色液包括0.1íTA、阿利新蓝、氯代十六烷基吡啶和氯化镧等。该染液能使红细胞和其他白细胞溶解,使嗜酸性粒细胞易于区别。外周血嗜碱性粒细胞数大于33/μl判为增高,大于50/μl为显著增高。本试验可作为Ⅰ型变态反应的筛选试验,阳性率可达60%~70%;而且可作为疗效考查的辅助指标。