③将反光镜(自带光源的显微镜除外)对准光源,集光器调到适当亮度。
④以左眼或右眼对准目镜,进行观察。旋动粗调节轮,使载物台渐渐上升,至标本的影象现出为止,拨动粗调限位器限位。
⑤旋动细调节轮,使载物台上、下微微移动,直到显出清晰的影象。
⑵高倍镜使用方法:
①依前法先用低倍镜将焦点调准,使物象清晰。
②将欲检标本的某一部分移至低倍镜视野中央。
③直接调转高倍物镜,稍将细调节轮上下旋动,至显出清晰的物象为止。
⑶油镜的使用方法:
①用油镜前,先将集光器上升到顶,虹彩放大,使亮度达到最强度。
②将需要详细观察的部分,移到视野中心,用压片夹固定,切勿移动。
③将高倍物镜移开,滴加一滴香柏油于切片被检部位。
④转换油镜头,使镜头与被检物间充满香柏油,然后转动细调节轮,直至有清晰的物象为止,此时切勿使用粗调节轮,以免压碎切片,损坏镜头。
⑤用完油镜后,必须将镜头和切片上的香柏油用擦镜纸擦去,并用沾有乙醚——酒精液(7:3)的擦镜纸擦拭镜头及载片,以免污损镜头。
3.使用显微镜注意事项
①移动显微镜时一手紧握镜臂,一手平托镜座,使镜身保持直立状态。
②凡光学部分不可用手指或其它物品(如毛巾、纸张)擦拭,要用清洁的擦镜纸,必要时加一滴乙醚——酒精液擦拭。
③不得随意拆卸显微镜的任何组成部分。
④不能用高倍镜检视任何不加盖片的标本,以免污染物镜,显微镜任何部分不应受潮。
⑤掉换高倍物镜或油浸镜后,即不能用粗调节轮,只能用细调节轮,以免损坏载片及镜头。
⑥使用中发生问题时,请随时报告教师,切勿自行处理。
组织切片制作原理和程序:
1.取材:要取最新鲜的正常的材料。由于各器官组织坏死变化很快,所以取材要求迅速。取材时要用锋利的刀片或剪刀,勿用镊子对组织加以压迫,以免组织破裂和变形。
2.固定:将取下的材料放在固定液中固定24小时,目的是防止腐败、保持原有结构并使组织硬化,便于处理,常用的固定液有10%福尔马林,Bouin液及Zenker液。
3.脱水及透明:材料固定后,要经过脱水和透明处理,才能包埋。脱水是除去组织中的水分,透明是一种能使石蜡、火棉胶溶解的溶剂,使组织透明,并使石蜡或火棉胶逐渐导入组织内。
4.包埋:材料脱水透明后,即可包埋,包埋可使材料有适当的硬度便于切成薄片,包埋常用石蜡和火棉胶,其中石蜡最常用,需时短,且可制成较薄的切片。
火棉胶则用于神经组织、眼球等大块或宜于收缩的材料。
5.切片及贴片:切片法有徒手切片、冰冻切片、石蜡切片和火棉胶切片。
石腊切片用于轮转式切片机或滑走切片机操作。火棉胶用于滑走切片机操作。
石蜡切片用蛋白甘油混合液贴附于玻片上,火棉胶切片,则可直接染色,染色后,封藏于玻片上。
6.染色:染色的目的式使细胞中的构造清楚,易于观察。染料的种类繁多,其性质也不同,有酸性、中性、碱性。染色方法有单一法、双重法、三重法。其中双重法以苏木素——伊红染色法最常用。
7.封藏:染色后的切片,用中性树胶或合成树胶加盖玻片封藏。
实验33 细胞的基本结构
一、目的要求:通过观察要求掌握细胞的基本结构。
二、准备工作:复习讲课内容和预习实验指导。
三、观察内容
1.卵细胞:1号切片
卵细胞是动物体内的大型细胞,观察其形态结构较为方便。
猫、猪或羊的卵巢切片,Bouin氏液固定,石蜡包埋,HE染色。
先用低倍镜观察,在靠近卵巢周边处,可见到成群存在(猫)或散在分布(猪、羊)的大型圆形卵细胞,在卵细胞周围还有一层扁平的细胞围绕,共同组成初级卵泡,此时的卵细胞系初级卵母细胞,外周的扁平细胞叫卵泡细胞。