5、干扰物的排除

Id和HAAA的干扰机制相似，均为桥联捕捉抗体和示踪抗体，所以二者消除干扰的方法也类似。但HAAA能与特定的分析抗原竞争，且与分析用抗体的结合力稍强，因动物源性抗体使用越来越广泛，因此它产生的干扰程度也较大，比Id的干扰更多特异性和弱结合力。影响因素包括性别、年龄、生活习惯（吸咽）和自身免疫性疾病等。

5.1预防：在患者接受动物源泉性抗体治疗前、中和后期，给予免疫抑制剂，如：环孢霉素、脱氧精胍菌素和环磷酰胺，即可大量阻止HAAA的产生，减轻动物源性抗体药品产生的负反应。这些免疫抑制法适用HAAA引起的干扰，对Id效果甚微。

5.2抗体的处理：去除抗体片段：由于HAAA能与分析用抗体中的Fc片段结合，Id能与分析用抗体的F（ab′）2与Fc结合，去除Fc可减少干扰物，降低动物源性Ig制剂的免疫原性。采用木瓜蛋白酶处理Ig去除Fc要比胃蛋白酶的效果更好。但是Id具有弱结合力，因此该方法对Id的干扰只能有限地减少。人源化抗体：用基因工程制备人源化嵌和抗体，通过将鼠Ig与人Ig的基因片段有序结合，得到低免疫原性的缺本，但要注意，它会诱导抗体产生人抗人抗体，而引起更多的麻烦。PEG的使用：即在大分子表面（如McAb）用水溶性PEG或mPEG包被，也能大大降低McAb的免疫原性。

5.3热处理和其他：目前不太主张用热或酸处理来灭活血清中的干扰物，因为大多数的分析物都不稳定，该方法曾用于CEA和CA72-4干扰物的处理。采用吸附在氟乙烯表面的鼠McAb、固相结合在琼脂糖凝胶珠上的蛋白G、蛋白A、三氟乙酸沉淀法、巯基试剂法、阳离子交换剂和亲和层析等方法，均对消除干扰物有一定效果。

5.4阻断剂的使用：阻断剂包括非免疫Ig、PcAb、联合IgG、非免疫鼠McAb.又可分为非特异性和特异性两类。目前已经有商品化的阻断剂如：IIR、NS-ABT、HBR、Heteroblock、MAB33及poly MAB33.将它们加入稀释液或预处理的样品中，通过非特异性和特异性阻断剂与干扰物的结合达到减少干扰。消除干扰的效果由干扰物的浓度、类别或亚类，以及阻断剂的类别和亚类决定。

5.4.1非特异性阻断剂：非特异性阻断剂一般是制备分析用正常动物血清Ig，它是多种蛋白的混合物，尽可能多地吸收Id.如果分析用抗体是不同种属，可用其中任何一种作为非Ig.若分析用抗体是同一种属（鼠类），建议添加小牛Ig作为阻断剂。非Ig的用量仍在讨论中。有建议用1%正常动物的血清为宜，但也有报道说此浓度不足以排除干扰物。商品化试剂中MAK33、MAB33等属于这类，MAK33必须热处理（60℃，10min）并配以小牛血清才有明显的效果。推测MAK33在高温条件下聚集形成巨大复合体，结合位点的增多使得Id大量结合，减低干扰。

5.4.2特异性阻断试剂：特异性阻断试剂是特异针对人Ig的。如IIR、HBR等。IIR是一种由Id和HAAA为免疫原产生的混合的鼠McAb，由于它与HAAA有较高亲和力（109L/mol），所以作为阻断HAMA的特异性试剂。HBR是鼠抗人IgM的McAb，在常规阻断过程中，消除干扰的效果依赖于HAMA和它之间的结合常数（通常为106L/mol）。由于它俩的高度结合力，在一些分析中的阻断能力强于非特异性阻断剂。特异性阻断剂与非特异性阻断剂都不能完全排除干扰物，但前者能对IgM引起的干扰更有效些，而后者尤其小牛血清能够阻断特异性试剂所不能阻断的干扰抗体。

5.5实验方法的改进：针对以上讨论及自身体会，提出以下几点改进意见：

（1）分析用抗体采用不同种属，如一株McAb、一株PcAb，使用与治疗用抗体相同属的抗体或使用PcAb作为阻断剂。

（2）在缓冲液中加入正常动物血清，它们能对Id有高亲和力。

（3）样品中的干扰存在瞬时性，时有时无，注意避开其干扰峰值，建议采用重复测量。

（4）双位点检测中推荐使用两步法测量，且在第一次洗板后加入阻断剂。

（5）对干扰样品作单独处理，同时将干扰物测出。