肺炎支原体
(一)生物学特性
菌体呈短细丝状,典型的形态类似酒瓶状,没有细胞壁,仅有细胞膜。Giemsa染色呈淡紫色。分离培养的最适pH为7.6-8.0。P1蛋白是肺炎支原体主要特异性免疫原,是目前血清学诊断的主要抗原。
(二)致病性
肺炎支原体可从口腔、呼吸道分离到,主要通过飞沫传染,是人类原发性非典型性肺炎的主要病原体之一。儿童和青少年易感,首先引起上呼吸道感染,然后下行感染。病理性变化主要是间质性肺炎、急性细支气管炎。还可引起肺外并发症。
(三)微生物学检验
采集咽分泌物、痰、支气管分泌物、胸水等。
1、分离与鉴定
这是确诊支原体感染的可靠方法之一。常以牛心消化液为基础另加20%小牛血清及新鲜酵母浸液制成液体或固体培养基。初次分离生长缓慢,通常先将标本接种于液体培养基中增菌,1周后培养基指示剂颜色改变,液体清晰,可转种于固体平板培养基,在5%CO2环境中培养,初次分离肺炎支原体需1-2周才长菌落。菌落常不出现“荷包蛋”样,需经数次传代后,菌落开始典型。肺炎支原体分离培养有时需20天或更长时间,对临床快速诊断意义不大。
支原体在固体培养基上长出典型菌落,依此可初步诊断,再进一步进行生化反应和血清学鉴定。生化反应如:
(1)葡萄糖、精氨酸、尿素分解试验:发酵葡萄糖产酸,不能利用精氨酸、尿酸。
(2)氯化三苯基四氮唑(TTC)还原试验:使无色TTC还原为粉红色。
(3)生长抑制试验(GIT)和代谢抑制试验(MIT)。
(4)红细胞吸附试验:肺炎支原体的菌落能发生红细胞吸附。
2、血清学试验
(1)特异性血清学试验
1)ELISA技术:敏感性和特异性高,快速、经济,并可检测IgM和IgG抗体,为目前诊断的可靠方法。利用ELISA捕获法,以抗P1蛋白单抗检测标本中的肺炎支原体P1蛋白,特异性高,敏感性高。
2)补体结合(CF)试验
诊断肺炎支原体常用的血清学方法,一般血清学滴度≥1:64~1:128即为阳性,病程中双份血清至少效价有4倍增长,近期感染可能性越大。主要检测IgM抗体。初次感染时出现阳性,再次感染时常不出现阳性。
3)间接血细胞凝集试验
敏感度略高于补体结合试验,主要检测IgM抗体。
(2)非特异性血清学试验
冷凝集试验:将患者血清与O型Rh阴性红细胞在4℃下作凝集试验。一般血清学滴度≥1:64为阳性,病程中双份血清至少效价有4倍增长,近期感染可能性越大。
3、PCR试验快速检测:敏感和特异性高,以特异性引物通过该技术从患者痰中检测肺炎支原体DNA。