pH可以影响酶与底物的亲和力，也影响酶的稳定。测定酶活性浓度时一定要选择在最适pH。多数酶的最适pH在5～8之间。 最适pH时酶反应速度最大，测定灵敏度最高；要使pH值保持稳定在测定酶活性时要使用缓冲液。