在细菌感染标本中，临床上常用的染色方法有革兰染色、抗酸染色和荧光染色。

1、单染色法

用一种染料将细菌和周围物体染成同一种颜色，称为单染色法。如吕氏亚甲蓝、结晶紫和稀释复红染色法。细菌经单染法处理后，可观察其大小、形态、排列及简单的结构，但不能显示各种细菌染色性的差异。

2、复染色法

用两种或两种以上不同染料可将细菌染成不同的颜色，称为复染法或鉴别染色法。该方法除可观察细菌的大小、形态与排列外，还反应出细菌染色特性，具有鉴别细菌种类的价值。常用的有革兰染色法和抗酸染色法。

(1)革兰染色

革兰染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法。除粪便、血液等极少数标本外，在培养前都要进行革兰染色、镜检。通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G-菌两大类，可初步识别细菌，缩小范围，有助于进一步鉴定。革兰染色除用于鉴定细菌外，病原菌革兰染色特性可为临床选择药物提供参考，帮助临床制定有针对性的治疗方案，因为G+菌与G-菌对一些抗生素表现出不同的敏感性，且其致病物质及其作用机制不同。

①细菌涂片经火焰固定，加结晶紫染液染1min，清水冲去染液。②加碘液媒染1min，水洗，甩干。③用95%乙醇脱色，轻轻摇动约30s，至无紫色洗落为止，水洗，甩干。④加稀释石碳酸复红或沙黄染液数滴进行复染，约30s，水洗。⑤干后显微镜下镜检观察结果，革兰阳性菌染成紫色，革兰阴性菌为红色。

(2)抗酸染色

抗酸染色也可将细菌分为两大类：即抗酸性细菌和非抗酸性细菌。因临床上绝大多数病原菌为非抗酸性细菌，所以抗酸染色不作为临床常规的细菌检查项目，只针对性用于结核病、麻风病等的细菌检查。

抗酸染色法：①细菌涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸气出现，切不可沸腾。染液因蒸发减少时，应随时补充，防止染液蒸干。持续染5min(奴卡菌需要加长时间)，水洗，甩干。②滴加3%盐酸乙醇脱色，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗，甩干。③加吕氏美蓝复染液数滴复染1min，水洗。④干后显微镜下镜检观察结果，抗酸杆菌染成红色，非抗酸杆菌为蓝色。

(3)荧光染色法

荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。主要用于结核分支杆菌、麻风分支杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。经荧光素染色的细菌，或荧光素标记的荧光抗体与相应抗原的细菌、病毒结合形成的复合物，在荧光显微镜下发出荧光。

除以上染色方法外，用于细菌鉴定的还有鞭毛染色、异染颗粒染色等。鞭毛染色后于显微镜下可以观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。疑为白喉棒状杆菌感染，进行涂片检查，除证实为革兰阳性典型棒状杆菌外，还需用异染颗粒染色，镜检异染颗粒，才能为临床早期诊断提供依据。

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